毛細管色譜柱的活化再生說明 毛細管色譜柱型號PEG-20M的柱效降低主要特征性現(xiàn)象有柱壓基本正常,但出現(xiàn)拖尾峰、禿峰、分叉峰、前延峰、峰變寬、基線漂移、理論板數(shù)降低、分離度降低等。需要進行再生處理,具體方法可參考:
1.一般情況下,順接色譜柱,按如下溶劑順序及條件沖洗:
95%水-5%甲醇(或乙腈)(1.0ml/min,1h以上)→100%甲醇(1.0ml/min,1h以上)→100%乙晴(1.0ml/min,1h以上)→75%乙晴-25%異丙醇(0.5ml/min,10倍柱體積以上)→100%異丙醇(0.5ml/min,10倍柱體積以上)→100%二氯甲烷(0.5ml/min,10倍柱體積以上)→100%正己烷(0.5ml/min,10倍柱體積以上,根據(jù)實際情況可忽略)→100%異丙醇(0.5ml/min,20倍柱體積以上)→95%水-5%甲醇(或乙腈)(0.5ml/min,30min;再升至1.0ml/min,10倍柱體積以上)→檢測用流動相平衡2h或至基線平穩(wěn),進樣測試。
在沖洗過程中,隨時關注柱壓變化,確保不超過4000psi;若超出,可通過降低流速,升高柱溫來調整,具體操作可咨詢具備相關專業(yè)知識背景和實踐經(jīng)驗的人士。
2.若上述方法效果不理想,可按如上溶劑順序和條件,先反接色譜柱沖洗→再順接色譜柱,用100%乙腈以1ml/min流速沖洗約2h→再用與流動相同比例的水-有機相以1ml/min流速沖洗約30min→后用流動相平衡2h或至基線平穩(wěn),進樣測試即可。
3.特別說明:
再生過程必須隨時關注柱壓變化,柱壓過高易導致硅膠變形與開裂及鍵合相極性端連接順序紊亂,同時要保證再生時間足夠。